基因突变试验-j9九游

基因突变试验是指使用化学诱变剂等手段人工诱导基因突变，以研究基因突变的原因、机制和后果。基因突变试验中，通常会将诱变剂加入到细菌或酵母细胞中，因为这些单细胞生物的繁殖速度快，且基因组相对较小，容易进行突变实验。接着，科学家们会观察这些细胞是否出现了新的突变，并使用各种筛选方法来挑选出具有新突变的细胞或个体。

基因突变试验方法有多种，其中包括：

测序法：通过双脱氧终止法进行基因突变试验的可靠方法。

聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析技术：通过聚合酶链反应扩增出可能包含突变的基因组片段，然后利用限制性内切酶对这些聚合酶链反应片段进行酶切，电泳检测后根据酶切片段的长度差异来判断是否存在突变位点。

探针扩增阻滞突变系统：又称等位基因特异聚合酶链反应，是利用tap dna聚合酶缺少3′到5′外切酶活性，聚合酶链反应引物的3′端末位碱基必须与其模板dna互补才能有效扩增的原理。

高分辨率溶解曲线分析技术：利用不同长度或不同碱基组成的dna序列溶解曲线不同的原理，在聚合酶链反应后直接运行高分辨率溶解即可完成对样品突变分析。

高效液相色谱法：该方法是基于发生错配的杂合双链dna与完全匹配的纯合双链dna解链特征的差异而进行检测的，可检测出含有单个碱基的置换、插入或缺失的异源双链片段。

基因突变试验流程如下：

实验试剂：qiagen dna ffpe tissue kit试剂盒。

实验仪器：离心机、生物安全柜、nanodrop2000分光光度计、lightcycler480。

实验步骤：

组织处理：将石蜡块固定至切片机上,调整切片机切片厚度设置为2μm。

组织切片：切取2μm厚度的组织片1张,先放入15%酒精中,然后从15%酒精中放入45水中捞片。

he染色：he染色。

he分析：厚度的组织片3片(如果组织块过小,需要多切几片),然后放入ep加入1ml二甲苯振荡混匀,以充分溶解组织周围石蜡,14000rpm离心2min吸去上清去除石蜡,如果石蜡过多,可以用二甲苯再洗一次;加入无水乙醇1ml(去除二甲苯),14000rpm离心2min吸尽上清后开盖直至残余乙醇全部挥发(大约10min);加入180μlatl和20μl蛋白酶k,震荡混匀;901h(注意管盖,由于90高温可能会导致开盖,以致液体被蒸发;时间不要太长短暂离心使液体聚于管底,加入200μlal,震荡混匀,然后加入200μl无水乙醇,震荡短暂离心使液体聚于管底,将整个液体全部移入收集柱中,然后8000rpm离心1min,丢弃收集管后将收集柱置于新的收集管中;加入500μlaw1漂洗液,离心8000 rpm,1min,丢弃收集管后将收集柱置于新的收集管中;加入500μl aw2漂洗液,离心8000rpm,1min,丢弃收集管后将收集柱置于新的收集管中;离心14000rpm,3min,以去除收集柱中的残余液体;加入ate(洗脱液)50μl,然后室温静置2min;离心14000rpm,1min,收集洗脱液。

4.dna浓度调整：用nanodrop2000分光光度计检测dna样品的浓度。

5.检测：按照仪器操作流程进行检测。